Práctica 11: Determinación sérica del grupo ABO

OBJETIVOS

·         Determinar el grupo sérico del sistema ABO.

·         Detectar los anticuerpos (AC) dirigidos contra los antígenos del sistema ABO presentes en el suero.

MATERIAL

·         Tres tubos de hemólisis

·         Gradilla

·         Parafilm.

·         Pipetas de Pasteur desechables.

REACTIVOS

·         SF.

·         Hematíes tipificados del grupo A, grupo B y grupo AB como control positivo.

MUESTRA

·         Suero problema.

PROCEDIMIENTOS

1-.PREPARACION DE HEMATIES TIPADOS A, B y AB

Seleccionamos 3 muestras de sangre pertenecientes a los grupos A, B y AB e identificamos 3 tubos hemólisis con las letras A, B y AB.

Ponemos en los tubos de hemólisis 0,5 ml de sangre de cada una de las muestras,  llenamos hasta arriba los tubos con SF y tapamos con parafilm. (Agitamos para que se mezcle bien la sangre con el SF)

Centrifugamos durante 5 min a 2500 rpm y una vez que ha finalizado la centrifugación extraemos el sobrenadante de cada tubo con una pipeta de Pasteur especial para cada uno de ellos.

Volvemos a llenar hasta arriba los tubos con SF y lo llevamos a la centrifuga (repetirlo 3 veces en total)

Del sedimento de hematíes obtenido del último lavado y centrifugación de cada uno de los tubos A, B Y AB, cogemos con una micropipeta 0,1 ml y lo depositamos en 3 tubos pequeños identificados con A, B y AB.

1.       Añadimos 1,9 ml de SF a cada uno de los tubos.

2.       Los tapamos con parafilm y guardamos en la nevera hasta su utilización.

2-.DETERMINACION SERICA DEL GRUPO ABO

Identificamos 4 tubos pequeños con las letras A, B, AB y C y con una pipeta de Pasteur le añadimos 3 o 4 gotas del suero problema en cada uno de ellos.

Añadimos 3 o 4 gotas de los hematíes tipados anteriormente A, B y AB en sus tubos correspondientes y mezclamos bien mediante agitación suave.

Finalmente centrifugamos a 2500 rpm durante 1 min y  observamos la aglutinación de los tubos en el visualizador, y si es preciso, en el microscopio.

RESULTADOS

LECTURA DE RESULTADOS

Para observar aglutinación en los tubos debemos golpear suavemente en el fondo de los tubos con el dedo índice y medio para despegar los hematíes y observar mejor la aglutinación:

·         Presencia de aglutinación (+): se forman grumos de color rojo en un líquido claro.

·         Ausencia de aglutinación (-): los hematíes se resuspenden homogéneamente al golpear el fondo del tubo.

 

OBSERVACIÓN

Al aglutinar en A, B y AB significa que tiene anticuerpos A y B en el suero por lo que su grupo sanguíneo será 0.