Práctica 15: DiaClon Type + Screen

OBJETIVO

Comprobar el grupo sanguíneo ABO y RhD y verificar la presencia de anticuerpos irregulares

REACTIVO

·         1 microtubo que contiene anti-A monoclonal [línea celular A5]

·         1 microtubo con anti-B monoclonal [línea celular G½]

·         1 microtubo con anti-D monoclonal [líneas celulares LHM59/20 (LDM-3) + 175-2]

·         3 microtubos con antiglobulina humana poliespecífica (anti-IgG de conejo y anti-C3d monoclonal, línea celular C139-9)

·         Conservante: < 0,1% NaN3.

Todos ellos incluído en la matriz gel de la tarjeta ID-Card ˝DiaClon Type + Screen˝

·         ID-DiaCell I-II-III para el escrutinio de anticuerpos

·         ID-Diluent 2: LISS modificada para suspensiones de eritrocitos.

La antiglobulina humana anti-lgG includia en la tarjeta ID-Card ˝DiaClon Type + Screen˝ no es específica únicamente para las cadenas pesadas, por lo cual puede también reaccionar con las cadenas ligeras kappa (k) y lambda (l) de las moléculas IgA e IgM.

MATERIAL

·         Micropipetas

·         Puntas de pipeta

·         Incubadora a 37ºC

·         Tubos para las suspensiones

·         Centrífuga

MUESTRA

Sangre preferiblemente recién extraída

PROCEDIMIENTO

 

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA DE SANGRE

a) Suspensión de hematíes (para la determinación ABO/D)

Preparamos una suspensión de hematíes al 5% en el ID-Diluent 2:

Dejamos que el diluyente alcance la temperatura ambiente antes de utilizarlo.

Pipeteamos 0,5 ml del ID-Diluent 2 en un tubo limpio y agregamos 50 μl de sangre total o 25 μl de concentrado de hematíes, mezclando cuidadosamente.

b) Plasma o suero para el escrutinio de anticuerpos.

Cuando las muestras no vayan a analizarse inmediatamente deben conservarse a 2–8 °C después de la separación durante un máximo de 48 horas, y después a -20 °C según los criterios/directrices locales/nacionales.

PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA

1. Identificamos la tarjeta ID-Card

2. Retiramos la lámina de sellado sólo de los microtubo que se vayan a utilizar manteniendo la tarjeta ID-Card en posición vertical.

Pipeteamos 10  μl de la suspensión de hematíes del paciente en los primeros 3 microtubos (anti‑A, anti-B, anti-D) de la tarjeta-ID.

Pipetamos 50 μl de cada ˝ID-DiaCell I-II-III˝ en los microtubos 4, 5 y 6 (3 x AHG).

Agregamos 25 μl de plasma o de suero del paciente en los microtubos 4, 5 y 6.

Incubamos la tarjeta ID-Card durante 15 minutos a 37 °C en la ID-Incubadora.

Centrifugamos la tarjeta ID-Card durante 10 minutos en la ID-Centrífuga.

Leemos y anotar las reacciones.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Positivo: Los hematíes aglutinados forman una línea roja sobre la superficie del gel o están repartidos en el gel.

Negativo: Sedimento compacto de hematíes en el fondo del microtubo.

 Una reacción negativa indica la ausencia de anticuerpos irregulares detectables en el suero o plasma del paciente.

Una reacción positiva indica la presencia de anticuerpos irregulares. Escribir los resultados de la reacción en la tabla de antígenos.