Práctica 14: Tarjeta diaclon

OBJETIVO

Determinar los grupos sanguìneos ABO/Rh combinado con la prueba inversa o grupo sérico

REACTIVOS

La tarjeta ID-Card ˝DiaClon ABO/D + Reverse Grouping˝ contiene:

·         anti-A monoclonal [línea celular A5]

·         anti-B [línea celular G½]

·         anti-D [líneas celulares LHM59 / 20 (LDM3) + 175-2]

Todo ello en la matriz de gel.

·         El microtubo (ctl) es el control negativo.

·         La tarjeta-ID contiene también dos microtubos con gel neutro que sirven para la prueba inversa del grupo sanguíneo con hematíes A1 y B.

·         Conservante: < 0,1% NaN3.

·         ID-Diluent 2: LISS modificado para la preparación de las suspensiones de hematíes.

·         Hematíes-tests: ID-DiaCell A1 + B en una suspensión al 0,8%, en viales de 10 ml, listos para su uso.

MATERIAL

·         Micropipetas

·         Puntas de pipeta

·         Tubos para las suspensiones

·         Centrífuga

MUESTRA

Sangre preferiblemente recién extraída

PROCEDIMIENTO

Preparación de la muestra de sangre

a) Para la determinación de ABO/D

Preparamos una suspensión de hematíes al 5% en ID-Diluent 2 como sigue:

Dejamos que el diluyente alcance la temperatura ambiente antes de su utilización.

1.       Pipetamos 0,5 ml de ID-Diluent 2 en un tubo limpio.

2.       Agregamos 50 μl de sangre total o 25 μl de concentrado de hematíes, mezclando cuidadosamente.

La suspensión de hematíes puede utilizarse inmediatamente.

b) Suero o plasma para el sérico o contraprueba

Procedimiento de la prueba

1.       Identificamos la tarjeta ID-Card

2.       Retiramos la lámina de sellado sólo de los microtubo que se vayan a utilizar manteniendo la ID-Tarjeta en posición vertical.

3.       Pipetamos 50 μl de ˝ID-DiaCell A1˝ en el microtubo 5 (A1) y 50 μl de ˝ID-DiaCell B˝ en el microtubo 6 (B).

4.       Agregamos 50 μl plasma / suero del paciente en los microtubos 5 y 6. Se recomienda una incubación de 10 minutos a temperaura ambiente

5.       Agregamos 10 μl de la suspensión de hematíes del paciente en los microtubos 1–4 (A, B, D, ctl).

6.       Centrifugamos la tarjeta ID-Card durante 10 minutos en la ID-Centrífuga.

7.       Leemos y anotamos las reacciones.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Positivo: Los hematíes aglutinados forman una línea roja sobre la superficie del gel o están repartidos en el gel.

Negativo: Sedimento compacto de hematíes en el fondo del microtubo.