Práctica 10: Determinación celular de los grupos sanguíneos ABO y Rh en tubo

OBJETIVO

Determinar los grupos sanguíneos del sistema ABO y observar la presencia de aglutinación en el tubo

MATERIAL

·         Gradilla

·         Parafilm

·         Tubo de hemólisis

·         6 tubos pequeños

·         Pipeta de Pasteur

·         Suero fisiológico

·         Micropipeta automática y puntas de plástico desechables

·         Portaobjetos

·         Centrífuga

REACTIVOS

·         SF

·         Anti-A

·         Anti-B

·         Anti-AB àactúa como control

MUESTRA

·         Sangre anticoagulada

PROCEDIMIENTO

LAVADO DE HEMATÍES

Ponemos en un tubo de hemólisis 0,5 ml de sangre-problema y llenamos hasta arriba de SF

Tapamos con parafilm y agitamos para que se mezcle bien la sangre con el SF

Centrifugamos durante 5 min a 2.500 rpm y extraemos el sobrenadante con una pipeta de Pasteur

Volvemos a repetir 2 veces más a partir del llenado del tubo con SF

REALIZACIÓN DE UNA DILUCIÓN DE HEMATÍES AL 5%

Del sedimento de hematíes obtenido del último lavado cogemos 0.1 ml de hematíes y 1,9 ml de SF y lo depositamos en un tubo pequeño.

DETERMINACIÓN CELULAR DE GRUPOS SANGUÍNEOS ABO Y Rh

Lo primero que tenemos que hacer es rotular 3 tubos pequeños con A, B, AB

Seguidamente depositamos en cada uno de ellos 3 o 4 gotas de la dilución de hematíes al 5% y añadimos 3 o 4 gotas de suero anti-A, anti-B, anti- AB en sus tubos correspondientes

Agitamos cada uno de los tubos para que se mezclen bien los reactivos con los hematíes y esperamos 2 min para observar las reacciones de aglutinación resultantes.

RESULTADO

Observación de la aglutinación en el tubo: se debe golpear suavemente el tubo en el fondo con los dedos índice y medio para despegar los hematíes y observar mejor la aglutinación:

•Presencia de aglutinación (+): se forman grumos de color rojo en un líquido claro

•Ausencia de aglutinación (-): los hematíes se resuspenden homogéneamente al golpear el fondo del tubo