Práctica 13: Determinación del antígeno Du

OBJETIVO

Poner de manifiesto el Ag D^u (Ag D débil) mediante prueba de Coombs indirecta enfrentando hematíes problema a un suero anti-D específico comercial y, posteriormente, al reactivo de Antiglobulina humana (AGH)

MATERIAL

·         Material para lavado y dilución de hematíes.

·         Tubo de hemólisis.

·         Pipeta Pasteur.

·         Baño termostático.

REACTIVOS

·         AGH

·         SF

·         Suero anti-D

MUESTRA

Hematíes problema Rh-

 

PROCEDIMIENTOS

1-. PREPARACIÓN DE OS HEMATÍES PROBLEMA Rh -

Realizamos un lavado y una dilución al 5% de los hematíes problema tipados Rh-  y realizamos la prueba de Coombs directa sobre los hematíes problema tipados Rh-.

2-. DETERMINACIÓN DE COOMBS INDIRECTO

En un tubo de hemólisis depositamos 2 o 3 gotas del reactivo anti-D y le añadimos unas 2 o 3 gotas de la suspensión al 5% de hematíes problema Rh- (Agitamos suavemente)

Posteriormente incubamos la mezcla en baño termostático durante 15-30min

Una vez pasados los 15-30 minutos lavamos la mezcla con 1 ml de SF.

El lavado lo repetimos 2 veces más.

Al sedimento obtenido con el último lavado añadimos dos o tres gotas de AGH y centrifugamos a 2.500rpm durante 1 minuto.

Resuspendemos el sedimento obtenido con el último lavado dando pequeños golpecitos en el fondo del tubo (si es necesario, añadir unas gotas de SF.) y observamos la presencia o ausencia de aglutinación en el visualizador (si es necesario, en el microscopio.)

 

RESULTADOS

LECTURA

Observación macroscópica de la aglutinación:

·         Presencia de aglutinación (+): Aparecen grumos rojos oscuros que flotan en el líquido.

·         Ausencia de aglutinación (-): Los hematíes permanecen en forma de suspensión homogénea de color rojizo.

 

 

OBSERVACIÓN

La prueba de Coombs directa sobre los hematíes Rh- siempre tiene que dar - y expresa que los hematíes problema no poseen anticuerpos sobre su membrana; si da + la prueba de Coombs indirecto para detectar el Ag Du no será válida.

Si la prueba de Coombs indirecto es positiva los hematíes problema pertenecerán definitivamente al grupo Rh+

Si la prueba de Coombs indirecto es negativa los hematíes problema pertenecerán definitivamente al grupo Rh-